EZ Trans細胞轉染試劑（Ⅱ）

產(chǎn)品描述
       EZ Trans細胞轉染試劑Ⅱ，作為新一代的轉染試劑，其轉染原理是帶正電的聚合物與核酸分子的帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后，與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用，并通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細胞。該產(chǎn)品經(jīng)過(guò)本公司的優(yōu)化處理，具有轉染效率高，細胞毒性低，操作簡(jiǎn)單，重復性好，適用范圍廣等特點(diǎn)。

訂購信息

保存方法
       冰袋運輸，4℃保存，保質(zhì)期12個(gè)月。不可冷凍！
使用方法
（以 24 孔板為例，其他培養皿中轉染請參考表1）
1. 接種細胞
對于貼壁細胞，轉染前18-24 h進(jìn)行鋪板（不含抗生素），使其在轉染時(shí)的密度大約在80%左右。對于懸浮細胞，轉染當天，在配制EZ Trans-DNA復合物之前進(jìn)行鋪板，每500 µL生長(cháng)培養基中加入4~8×10⁵cells。
【注】：培養液中的血清不影響轉染效率。轉染試劑使用量受細胞類(lèi)型及其他實(shí)驗條件影響，建議初次使用時(shí)設置梯度進(jìn)行優(yōu)化合適的使用量。
2. 準備EZ Trans-DNA復合物
（1）對于每孔細胞，將1 μg 質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無(wú)血清的高糖DMEM培養基（或OPTI-MEM I 培養基），混勻。
（2）對于每孔細胞，將3 μL EZ Trans轉染試劑稀釋到40 μL無(wú)血清的高糖DMEM培養基（或者OPTI-MEM I 培養基），輕輕混勻。
【注】：無(wú)血清的高糖DMEM培養基是稀釋液，不能使用含血清的培養基進(jìn)行DNA和EZ Trans轉染試劑的稀釋。因為EZ Trans-DNA轉染復合物的形成過(guò)程不能含有血清。
（3）將稀釋好的EZ Trans轉染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中，輕輕混勻。
【注】：此混合的順序不能反向進(jìn)行。
（4）室溫放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA復合物。
3. 轉染細胞
（1）將上述80 μL EZ Trans-DNA轉染復合物均勻滴入到含細胞的培養皿中。輕輕晃動(dòng)培養皿或輕微振蕩，讓EZ Trans-DNA復合物分散均勻。
（2）在37℃，5% CO2培養箱培養6-18 h，去除含EZ Trans-DNA復合物的培養液，更換新的培養液，繼續培養至對轉入基因表達分析。
【注】：篩選穩定轉染細胞株，轉染細胞24 h后，將細胞傳代至新鮮的生長(cháng)培養基中（將細胞稀釋10倍以上），在37℃，5% CO2培養箱中孵育24 h，加入篩選培養基。在有轉染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下，約 1～2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長(cháng)培養基。

注意事項
1.質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高純度無(wú)內毒素轉染級質(zhì)粒。通過(guò)260 nm光吸收測定DNA 濃度，260 nm / 280 nm比值確定DNA純度（比值應該在1.8～2.0的范圍之內）。如有可能，請通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。
2. 細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保細胞沒(méi)有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養細胞。
3. 細胞培養液要求：EZ Trans細胞轉染試劑可用于有血清培養基的轉染，并且轉染前不需要換培養基。但是，制備轉染復合物時(shí)要求用無(wú)血清培養基稀釋DNA和轉染試劑，因為血清會(huì )影響復合物的形成。確保細胞培養液沒(méi)有被細菌、真菌或支原體污染。轉染時(shí)培養液中不添加抗生素。
4. 試劑用量的優(yōu)化：DNA濃度和轉染試劑使用量受細胞類(lèi)型及其他實(shí)驗條件影響，初次使用應優(yōu)化DNA濃度和轉染試劑量以得到大的轉染效率。使用者可嘗試每 1 μg DNA使用 1～4 μL 體積EZ Trans細胞轉染試劑進(jìn)行優(yōu)化。DNA和轉染試劑的比例，通常推薦是1:2~1:5。

【注】：該表使用量?jì)H供參考，具體使用量還需根據細胞類(lèi)型及其他實(shí)驗條件進(jìn)行優(yōu)化。使用時(shí)DNA（μg）: EZ Trans細胞轉染試劑（μL）比值保持在1:2~1:5。